高效液相色譜是色譜法的一個重要分支。該方法已成為化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術。以制藥領域為例：我國藥典收載高效液相色譜法項目和數量比較表：
鑒于HPLC在全行業運用越來越廣泛，因此每一個實驗室分析人員都應該熟練掌握并應用HPLC，對于一些常見的故障分析應該做到游刃有余，才能在運行故障的時候即使解決問題，提高工作效率。小編整理了約30條常見HPLC故障及對策分析方案，分為三天推送，大家不要錯過哦。
保留時間發生漂移或快速變化原因？
關于漂移問題：
① 溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置， 保持柱溫恒定；
② 流動相發生變化，解決辦法是防止流動相發生蒸發、反應等 ；
③ 柱子未平衡好，需對柱子進行更長時間的平衡。
關于快速變化問題
① 流速發生變化，解決辦法是重新設定流速，使之保持穩定；
② 泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出；
③ 流動相不合適，解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內進行適當混合。
出現拖尾或雙峰的原因？
① 篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子；
② 存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子；改換流動相或更換選擇性好的柱子 ；
③ 可能柱超載，減少進樣量。
HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法
① 樣品量不足，解決辦法為增加樣品量；
② 樣品未從柱子中流出。可根據樣品的化學性質改變流動相或柱子；
③ 樣品與檢測器不匹配。根據樣品化學性質調整波長或改換檢測器 ；
④ 檢測器衰減太多。調整衰減即可；
⑤ 檢測器時間常數太大。解決辦法為降低時間參數；
⑥ 檢測器池窗污染。解決辦法為清洗池窗；
⑦ 檢測池中有氣泡。解決辦法為排氣；
⑧ 記錄儀測壓范圍不當。調整電壓范圍即可；
⑨ 流動相流量不合適。調整流速即可；
⑩ 檢測器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。
做HPLC分析時，柱壓不穩定，原因何在？如何解決？
① 泵內有空氣，解決的辦法是清除泵內空氣，對溶劑進行脫氣處理；
② 比例閥失效，更換比例閥即可；
③ 泵密封墊損壞，更換密封墊即可；
④ 溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法；
⑤ 系統檢漏，找出漏點，密封即可；
⑥ 梯度洗脫，這時壓力波動是正常的。
更換了另一種牌號ODS柱，但保留時間不能重現，為什么？
這是因為被分析物可能具有形成氫鍵的能力。盡管過去幾年來，填料的制造技術有了極大的提高，但不同的廠商的ODS填料表面硅醇基的濃度不同。正是這些硅醇基可能與樣品發生相互作用。因此，同一 被分析物中的各組分在不同牌號的ODS柱上的相對保留時間就可能不同。在流動相中加入少量競爭物， 如三乙基胺（TEA），將會使硅醇基的成鍵能力飽和，從而能保證不同牌號柱子上的相對保留時間具有較好的重現性。如分離情況可以，系統穩定，達到系統適用性要求，就不必保留時間的重現。
HPLC柱驗收測試時柱壓過高為什么？
柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因。
① 拆去保護預柱，看柱壓是否還高，否則是保 護柱的問題，若柱壓仍高，再檢查；
② 把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降， 否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；
③ 將柱子的進出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子，（此時不要連接檢測器，以防固體顆粒進入流動池）。這時，如果柱壓仍不下 降，再檢查；只用于使用過的柱子。
④ 更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質，正是這些雜質將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請與廠商聯系。一般情況下，在進樣器與保護柱之間接一個在線過濾器便可避免柱壓過高的問題，SGE提供的Rheodyne 7315型，過濾器就是解決這一問題的最佳選擇。
色譜柱中的流動相會排干嗎？
不少做色譜分離試驗的人遇到過這樣的情形：不慎未及時補充流動相，泵將溶劑瓶中的流動相吸干了，HPLC系統由此而停止工作了。如此情況是否會損壞色譜柱？泵是否已將色譜柱中所有流動相都排 干了？色譜柱還能使用嗎？事實上，如果泵將溶劑瓶中的流動相吸干，并不會造成色譜柱的損壞。即使泵中充滿了空氣，泵也不會將空氣排入色譜柱。因為泵只能輸送液體，而不能輸送空氣。
相比之下，另一個更可能發生的情況是忘記蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。同樣，整個色譜柱干涸的情況不太容易發生，多半可能只是色譜柱兩端的幾個毫米變干了，因揮發掉所有溶劑是色譜柱變干需要相當長的時間。即使色譜柱真的變干了，也不一定就不可救藥了。可以嘗試用一種完全脫氣的、表面張力低的溶劑（如經氦氣脫氣的甲醇）沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助于浸潤填料表面；已脫氣的溶劑應該能夠溶解并去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要（以1mL/min的流速）沖一個小時或更多的時間被徹底浸潤，恢復到正常狀態。
基線漂移原因、解決方法
1.原因分析
① 柱溫波動。（即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動。通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。）
②流動相不均勻。（流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導致的漂移。）
③流通池被污染或有氣體
④檢測器出口阻塞。（高壓造成流通池窗口破裂，產生噪音基線）
⑤流動相配比不當或流速變化
⑥柱平衡慢，特別是流動相發生變化時
⑦流動相污染、變質或由低品質溶劑配成
⑧樣品中有強保留的物質（高K’值）以饅頭峰
樣被洗脫出，從而表現出一個逐步升高的基線。
⑨使用循環溶劑，不提倡。未調整檢測器。
⑩檢測器沒有設定在最大吸收波長處。
2.解決方法
①控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器
②使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動相在使用前進行脫氣，使用中使用在線脫氣或氦氣脫氣。
③用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用鹽酸）
④取出阻塞物或更換管子。參考檢測器手冊更換流通池窗。
⑤更改配比或流速。為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。
⑥用中等強度的溶劑進行沖洗，更改流動相時，在分析前用10-20倍體積的新流動相對柱子進行沖洗。使用離子對試劑、緩沖鹽更應注意平衡柱。
⑦檢查流動相的組成。使用高品質的化學試劑及HPLC級的溶劑 ⑧改變分析條件。使用保護柱，如有必要，在進樣之間或在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子。
⑨重新設定基線。使用新的流動相。
⑩將波長調整至最大吸收波長處。重選檢測波長。
規則的基線噪音產生的原因？
原因
①在流動相、檢測器或泵中有空氣（尖銳峰）
②漏液 。
③流動相混合不完全 。
④溫度影響（柱溫過高，檢測器未加熱）
⑤在同一條線上有其他電子設備（偶然噪聲）
⑥泵振動 。
解決方法
①流動相脫氣。沖洗系統以除去檢測器或泵中的 空氣。
②檢查管路接頭是否松動，泵是否漏液，是否有 鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。
③用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑
④減少差異或加上熱交換器
⑤斷開LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。 采用精密級穩壓電源。
⑥在系統中加入脈沖阻尼器。
（文章轉自：實驗與分析）
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