1．基本營養物質
（1）糖：六碳糖主要能源、維持滲透壓，含葡萄糖1-5%。
（2）氨基酸：維持生存需12種氨基酸（精、胱、亮、異亮、賴、蛋、苯丙、蘇、色、組、酪、纈）。谷氨酰胺需量最大,缺乏時細胞生長不良。
單 細胞培養 或細胞量少時,所需氨基酸的種類和量增多，細胞主要利用左旋氨基酸異構體。
（3）維生素：細胞大部分需水溶性B族維生素，Vitc不可少，1-10mg/100ml可促進正常細胞生長繁殖。
2．促生長因子、激素類物質
3．其它物質
基本元素、微量元素、促細胞貼附物質(纖粘連蛋白、層粘連蛋白laminin、IV型膠原、氨基多糖類)
4．水
主要成分和生存環境,要求高純度水。
5．溫度
哺乳動物及人源細胞最適培養溫度為35℃―37℃,對低溫耐受力比高溫強。39℃以上受損→死亡；不低于0℃時（0℃-34℃），細胞能生存，但代謝降低、分裂延緩。
6．氣體環境和pH
需O2、CO2，通氧量過大對細胞有毒害。CO2主要與維持pH有關，細胞培養最佳pH為7.2―7.4，通過緩沖系統和調節CO2含量，維持正常pH。開放培養要求5%CO2環境、HEPES(羥乙基哌嗪乙硫磺酸)10―50mmol/ml可防止pH變化。含Earle’s緩沖系統的培養基適合于5％CO2的培養條件，Hanks’緩沖系統的培養基僅含有0.35g/L NaHCO3，不能用于5％CO2的環境，若放入CO2培養箱，溶液將迅速變酸，使用時應注意。
7．濕度和光
開放培養相對濕度控制在95%。細胞培養需避光，紫外線或可見光可造成核黃素、酪氨酸、色氨酸等產生有毒的光產物，抑制細胞生長，降低其貼壁能力。
8．影響細胞生長的其它因素
接觸橡膠用品、收集細胞時離心速度過大、細胞接種濃度過低等。
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