1 一般法該法主要是滿足細(xì)胞形態(tài)的一般觀察。樣品處理時(shí)使用自制橡膠刮子將貼壁細(xì)胞從培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿上輕輕刮下來(lái)。刮下的細(xì)胞呈條狀懸浮在培養(yǎng)液中, 將含有細(xì)胞的液體倒人尖底離心管, 以8度角的速度離心8 一10 m in , 吸去上清液。其余步驟均與以上制樣相同。
2 原位包埋法要觀察特定的某個(gè)細(xì)胞或者細(xì)胞之間的連接時(shí), 必須使用原位包埋法。
3 細(xì)胞培養(yǎng)在載玻片上: 可將細(xì)胞連同載玻片一起進(jìn)行各步驟。有細(xì)胞的一面朝上與液體直接接觸。包埋前一定要在光學(xué)顯微鏡下選好被觀察的細(xì)胞區(qū)域。包埋有兩種方法: 倒扣法(將裝滿樹(shù)脂的膠囊倒扣在長(zhǎng)有細(xì)胞面的載玻片上); 頂扣法(長(zhǎng)有細(xì)胞面的載玻片倒扣在灌滿樹(shù)脂的膠囊上)。聚合后的塊在80 ℃加熱器上加熱5 一10 ha n , 即可從載玻片上冊(cè)下膠囊。聚合好的樣品塊其表面光滑、透亮、無(wú)氣泡, 在相差顯微鏡下可以看見(jiàn)特定的細(xì)胞。切片和染色均與以上制樣相同。
4 細(xì)胞培養(yǎng)在塑料培養(yǎng)皿中
(1) 樣品制備及準(zhǔn)確定位: 按常規(guī)制樣方法在培養(yǎng)皿中進(jìn)行固定、脫水、浸透、包埋和聚合。聚合后的樣品塊必須先定位后再修塊。在相差顯微鏡下找到要觀察的特定細(xì)胞, 用刀片或解剖針在樣品塊的樹(shù)脂面上畫(huà)一個(gè)"井"字, 要觀察的細(xì)胞在"井"字的正中間, 井字中間的"口"字大小可以切超薄切片為標(biāo)準(zhǔn)。最好在"井" 字的周?chē)肕a rk 筆再做一個(gè)記號(hào), 以便核對(duì)細(xì)胞的位置。
(2) 修塊: 用剪刀剪去塑料培養(yǎng)皿后, 在相差顯微鏡下很難再找到細(xì)胞。按"井"字劃痕范圍, 剪掉多余的樹(shù)脂。由于塊太小可以用鉗子夾住樣品塊進(jìn)行操作。注意不要用鉗子直接夾細(xì)胞, 否則會(huì)在細(xì)胞面上留下夾痕。
(3) 粘樣品及聚合: 取一個(gè)廢包埋塊做樣品托, 銼掉原有組織, 用E 不幻n 8 1 2 樹(shù)脂將修好的塊粘到樣品托上。如果把細(xì)胞面朝下粘, 由于細(xì)胞小且少, 難以掌握切到細(xì)胞的時(shí)機(jī); 樹(shù)脂與樣品之間如留有氣泡, 聚合后就形成空洞影響切片和樣品的牢固性, 因此宜將有細(xì)胞的一面朝上。60 ℃ 聚合24 ho
(4) 再修塊、切超薄切片和重金屬染色: 均與常規(guī)制備相同。