診斷試劑的研發過程，就是對所有可能影響檢測結果的因素進行不斷完善的方法確認過程。
一、方法的可行性
1. 操作方法的確定。根據已有的材料和技術確定操作方法，并在現有的方法上進行改進。
2. 對照樣本的選擇。陽性對照品選強、中、弱三種。
3. 數據處理方法的確定。確定影響結果穩定性的因素 ；是否定量（包括相對定量和絕對定量）。
4. 方法重復性的確定。方法是否穩定，是否具有不可控的影響因素 ；反應條件是否苛刻，能否通過規范化操作予以克服。
5. 方法的優化。要考慮所有影響反應的因素，包括濃度、體積、時間、加樣順序等。
二、方法操作特性的確定
高傳染性、低致病性疾病通常將閾值設置的高一些，會提高其特異性，避免出現假陽性 ；高致病性疾病要降低臨界值，避免出現假陰性動物，此方法會降低疫病傳播的可能性，但也會造成特異性的降低。
陰陽性臨界值的確定 ：對已經確診的陽性和陰性進行檢測，以檢測結果的區段作為橫坐標，以相應的樣本數量為縱坐標，做曲線圖 ；陽性與陰性的曲線存在不同程度的重疊區域。確定臨界值的有效工具——ROC 曲線。ROC曲線指受試者工作特征曲線，以敏感性為縱坐標，1-
特異性為橫坐標繪制成曲線，是反映敏感性和特異性連續變量的綜合指標，揭示敏感性和特異性的相互關系。（Youden 指數 = 敏感性 + 特異性 -1）
三、方法操作特性
1. 敏感性。（1）分析敏感性 ：被分析物可檢出的最小劑量，即靈敏度，可用終點稀釋法進行確定 ；（2）診斷敏感性 ：檢測陽性樣本占真陽性樣本的比例 ；檢測結果為陰性的陽性樣本為假陽性。建議樣本量不應少于 500 ～ 1000，并且應在目的群里隨機采樣。
如何篩選陽性樣本。采用統計學方法，對一群混合樣本（數千份）進行檢測，并將檢測結果進行統計學分析。如果檢測結果能夠明顯的分在兩個區域，即陽性與陰性分在不同的區域，則可以間接的說明該方法得到了臨床檢測樣本的預期結果。
2. 特異性。（1）分析特異性 ：被分析物與其他物質的交叉反應程度 ；（2）診斷特異性 ：檢測陽性樣本占真陰性樣本的比例。檢測結果為陽性的陰性樣本為假陽性。建議的樣本量為 1000 ～ 5000，并且應在目的群里隨機采樣。
3. 重復性。是用本方法在正常和正確操作情況下，由同一操作人員，在同一實驗室內，使用同一儀器，并在短期內，對相同試樣所做多個單次測試結果，在 95% 概率水平兩個獨立測試結果的最大差值。
4. 重現性。指在不同實驗室由不同分析人員測定結果之間的精密度。
5. 符合率。待評價方法判定的結果與金標準方法的結果相同的數占檢測樣本總數的比例（金標準 ：指一種或一套用于準確確定感染和非感染的方法）。
6. 一致性。待評價方法判定的結果與另一種診斷方法的結果相同的數占檢測樣本總數的比例。
四、在使用過程中對該方法使用效果的持續監測
1. 保存期實驗。至少 3 批診斷制品的保存期實驗報告，包括各主要試劑的保存期實驗報告。
2. 臨床實驗。臨床實驗中使用的制品應不少于 3 批，臨床樣品檢測數量不少于 1 000 份，犬貓等寵物樣品檢測數量不少于 500 份，臨床樣品中應包括陰性樣品，陽性、弱陽性樣品，其檢測結果需用其他方法確認。
五、保存期的確定
與原始的成品檢驗數據進行比較，保存期的定期 = 能夠達到質量標準的最長期限 -3 個月。對預期保存期不到 12 個月的獸用生物制品，在前 3 個月內應每個月進行一次檢測，以后每 3 個月檢測一次，對預期保存期超過 12 個月的，在保存期的前12 個月內應每 3 年進行一次檢測，在第二年中每 6個月進行一次檢測，以后每年進行一次檢測。
六、臨床實驗
1. 第三類體外診斷試劑申請人應當選定不少于3家（含3家）、第二類體外診斷試劑申請人應當選定不少于2家（含2家）臨床試驗機構，按照有關規定開展臨床試驗。
2．體外診斷試劑的臨床試驗機構應獲得國家食品藥品監督管理總局資質認可。
3．申請人應根據產品特點及其預期用途，綜合不同地區人種、流行病學背景、病原微生物的特性等因素選擇臨床試驗機構。臨床試驗機構必須具有與試驗用體外診斷試劑相適應的專業技術人員及儀器設備，并能夠確保該項試驗的實施。
4.申請人應當在臨床試驗前制定文件明確各方的職責分工，與各臨床試驗機構協商制定統一的臨床試驗方案，按照臨床試驗方案組織制定標準操作規程，并組織對參加試驗的所有研究者進行臨床試驗方案和試驗用體外診斷試劑使用的培訓，以確保臨床試驗方案和試驗用體外診斷試劑操作的一致性，并在臨床試驗過程中促進各研究者之間的溝通。
5．在臨床試驗開始前，申請人應與臨床試驗工作人員進行臨床試驗的預試驗，使其熟悉并掌握該產品所適用的儀器、操作方法、技術性能等，以最大限度地控制試驗誤差。
6．在臨床試驗過程中，申請人應考慮吸收流行病學、統計學、臨床醫學、檢驗醫學等方面專業人員（或知識），以保證臨床試驗科學、合理地開展。
七、診斷試劑的前景和發展方向
隨著社會日新月異的變化，養殖規模的擴大，標記疫苗、基因工程疫苗、亞單位疫苗可作為鑒別診斷試劑。高度集成、自動化的儀器診斷是未來診斷的發展方向。診斷試劑操作簡單、快速、便于普及，滿足了基層客戶的個性化需求。
摘自：體外診斷POCT論壇 ：