做化學發光，是選擇吖啶酯平臺還是堿性磷酸酶平臺？或者是吖啶酯平臺好，還是堿性磷酸酶平臺好？這類問題，是我們經常被問到的。
先說結論：各有優劣！
吖啶酯、吖啶磺酰胺是直接化學發光的代表，無須催化直接發光。屬于閃光型。四大家中雅培用的是吖啶磺酰胺，西門子Centaur系列用的是吖啶酯。
（圖片來自于網絡） 常見的酶促發光平臺有辣根過氧化酶（HRP)、堿性磷酸酶（AP），這種發光是需要酶催化底物而產生光信號，而且光信號是輝光型。AP酶代表化學發光試劑廠家：貝克曼、邁瑞等，HRP代表廠家安圖。
常見的是以三聯吡啶釕標記抗體，以三丙胺（TPA）為電子供體，在電場中發生電子轉移而發光化學發光反應。代表廠商就不用多說了，四大家中有羅氏，國內的廠商中有普門、聯眾泰克、安賽等。
電化學發光高端但也想對小眾，國內主流的仍然以吖啶酯（AE）和堿性磷酸酶（AP）兩個發光平臺為主。2019年底我們調研，AE和AP兩個試劑廠家占比大概是50%：50%；到2022年底，我們再次的調研結果成了60%：40%。AE的“玩家”占了上風。
有意思的是，很多新進入發光領軍的“玩家”都會選擇AE平臺。我們也問過一些客戶他們選擇AE發光平臺的考量是什么，總結起來答案有兩種：1. 這個工藝、方法比較簡單；2. 成本比較低。很少有人對他們做一個系統的比較。
下面，我也是基于我們派博思內部的一些經驗，介紹吖啶酯（AE）和堿性磷酸酶（AP）兩種發光的特點。（這也是我2022年CACLP衛星會分享的內容，如有不充分的地方，歡迎留言交流）
吖啶酯（AE）和堿性磷酸酶（AP）兩種發光的特點
國內最常用的吖啶酯或吖啶磺酰胺其實只有以下兩種。
發光基理也差不多，如下圖：
那么，吖啶酯（吖啶磺酰胺）化學發光的特點是什么？
標記相對簡單 —— 蛋白與吖啶酯（磺酰胺）直接孵育、透析即可 無需催化劑 —— 堿性環境的H2O2即可直接激發發光 閃光型 —— 發光信號持續時間很短，對發光儀要求高
但我們從一些文獻中也獲取到一些信息，比如西門子早期就做了大量的研究，他們研究了很多不同結構的吖啶酯對試劑性能的影響。
Analytical Biochemistry 406 (2010) 204–213 研究表明，不同的項目或者說不同的抗體，最適合的吖啶酯（吖啶磺酰胺）的結構其實是不一樣的。換句話說，要想讓試劑達到最佳的性能，這個抗體連哪種結構的吖啶酯，是不是都要試一遍？據說，雅培內部也有各種各樣結構的吖啶磺酰胺。所以，從這個角度來說，AE發光試劑的開發也不見得就簡單。之所以覺得簡單，可能我們還沒有真正到人家的那個高度。
對于AP，其發光原理和吖啶酯完全不同。但不管是哪種底物，其原理可以理解為分成兩步：第一步是底物A催化產生中間產物B，中間產物B分解成終產物C產生光信號。
從A到B的過程，所有底物一般都進行的很快，但從B到C，產生光信號的時間，不同的底物差別挺大。就拿AMPPD來說，從A到B特別快，但是從B到C很慢；而APS-5，從B到C能做到非常快，所以發光時間大大縮短。但越快的同時，穩定性可能會受到影響。
我們總結常見的AP底物的發光強度、發光時間和穩定性排序：
發光強度和發光時間： AMPPD<CDP-Star<APS-5所以，在AP的試劑體系中，有以下幾個特點：
AP與底物需要額外的時間，出結果的時間會長；
底物本身有一定的開發難度和額外成本；
我們在開發的試劑的過程中，也發現AP其實還有其他特點：
偶聯標記工藝過程長，可能一次需要2天的時間；
但工藝比AE更加可控（AE偶聯雖然簡單，但容易受到溫度等影響，而且有時候高濃度會有氣溶膠污染）。
匯總一下，兩個平臺的優缺點如下圖所示。優缺點都不少，其實沒有完美的平臺。
很多人說，AE比AP有一點很大的優勢，就是出結果的時間短。其實現在也不盡然，因為正如我上面所述，AP搭配APS-5，也可以做到1分鐘內的孵育時間，讓出結果更快。
注：文章來源于蘇州派博斯生物技術有限公司的公眾號PBSolutions